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ATCC細(xì)胞株穩(wěn)定整合試驗(yàn)中的幾個(gè)關(guān)鍵因素

更新時(shí)間:2016-08-09      點(diǎn)擊次數(shù):2574
     ATCC細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系(cell line), 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。    計(jì)穩(wěn)定株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)需要考慮的因素有哪些
    ATCC細(xì)胞株穩(wěn)定整合試驗(yàn)中的幾個(gè)關(guān)鍵因素:
    1),外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下,低拷貝甚至是單拷貝可以減少
    人為實(shí)驗(yàn)因素的干擾。
    2),整合的幾率,這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度,而且還可以幫助
    人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
    3),整合位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄活躍度,決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達(dá)質(zhì)量。zui理
    想的狀況是單拷貝,但轉(zhuǎn)錄活性比較高。
    4),整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點(diǎn)決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定 性,有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失,從而導(dǎo)致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
    5),使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個(gè)不同單克隆穩(wěn)定株。因?yàn)榉€(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內(nèi)源基因,所以實(shí)驗(yàn)時(shí)通過(guò)使用混合穩(wěn)定株,或者對(duì)多個(gè)單克隆穩(wěn)定株進(jìn)行比較,可以幫助研究人員獲得更的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
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